کلونینگ و تعیین توالی ژن انتقال‌دهنده هگزوز 2 (HXT2) از مخمر ساکارومایسس سرویزیه سویه ایرانی

  سابقه و هدف: ساکارومایسس سرویزیه دارای 20 ژن کد‌کننده پروتئین‌های انتقال‌دهنده هگزوز شامل HXT1 ، HXT17 ، GAL2 ، SNF3 و RGT2 می‌باشد. از میان این خانواده ژنی، هفت ژن ( HXT7-HXT1 ) نقش مهمی در فرآیند تولید الکل دارند. هدف این مطالعه شناسایی و جداسازی ژن HXT2 از ژنوم مخمر ساکارومایسس سرویزیه از طریق PCR و کلونینگ آن در وکتور دارای پروموتور بیانی مناسب به منظور پایه‌ای برای طراحی پلاسمید بیانی و نهایتاً مخمر نوترکیب در ایران بود.   مواد و روش ‌ ها: در این تحقیق پس از تهیه پرایمرهای اختصاصی، ژن مورد نظر با روش PCR تکثیر یافت و به پلاسمید pTZ57R/T با کمک آنزیم‌های برشی EcoRI و HindIII منتقل گردید. پس از ترانسفورم pTZ57R/THXT2 به درون باکتری حد واسط اشیرشیاکلی، پلاسمید نوترکیب با روش هضم آنزیمی و نرم‌افزاری مورد ارزیابی قرار گرفت.   یافته ‌ ها: ژن HXT2 که به وسیله Restriction Enzyme از پلاسمید pTZ57R/THXT2 جدا شده بود دارای اندازه صحیح در الکتروفروز ژل آگاروز می‌باشد. بررسی نرم‌افزاری نشان داد که این ژن پروتئین با وزن مولکولی 840/59 کیلو دالتون را کد کرده و دارای 541 اسید‌آمینه و نقطه ایزوالکتریک آن 3/8 می‌باشد. نتیجه ‌ گیری: در این مطالعه ژن HXT2 از طریق بهینه‌سازی PCR از ساکارومایسس سرویزیه سویه ایرانی جدا و در یک میزبان پروکاریوتیک، کلون شد. این اولین گزارش از جداسازی و کلونینگ این ژن از طریق مهندسی ژنتیک در ایران است که می‌تواند برای کلونینگ در وکتور بیانی به منظور افزایش راندمان تولید الکل طی فرآیند تخمیر الکلی به کار برده شود.